- 贾峥;张文新;李丽莉;孙楠;曲守方;黄杰;
目的制备染色体拷贝数变异(CNVs)国家参考品,并进行标定。方法收集3份正常人样本,24份染色体非整倍体异常样本,11份微缺失微重复样本,提取基因组DNA,制备成国家参考品。用4家协作单位的染色体拷贝数检测试剂盒对国家参考品性能进行验证,确定准确性,并考察国家参考品在不同条件下(37℃条件下放置4周;放置于37℃条件下4周,期间拿出反复冻融3次)的稳定性及均匀性。结果对43份浓度为15(±1)ng/μL国家参考品的检测结果中,有三家单位均检测出国家参考品标示的结果,有1家单位漏检一例嵌合体样本(1p36 30%)。经不同条件(37℃条件下放置4周;放置于37℃条件下4周,期间拿出反复冻融3次)处理的国家参考品的稳定性结果均一致,均匀性的结果均一致,表明满足参考品的要求。结论成功建立染色体拷贝数变异国家参考品,该参考品可满足对染色体拷贝数检测的要求,经多家实验室进行验证,可用于国内大多数试剂盒的性能评价及临床实验室的质量评价。
2019年04期 v.11;No.62 256-262+294页 [查看摘要][在线阅读][下载 2766K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 李玥;袁林;王青;高薇;史伟;孟庆红;于丹;姚开虎;
目的分析临床和实验室诊断百日咳病例的临床流行病学特点,并比较细菌培养与荧光定量PCR 2种病原菌检测方法的应用价值。方法收集北京儿童医院864例百日咳送检患儿的临床信息,并采用细菌培养和荧光定量PCR检测其鼻咽拭子标本,分析不同诊断标准下百日咳临床流行病学特点,以及2种实验室诊断的临床应用价值。结果临床诊断与细菌培养和荧光定量PCR实验室诊断的百日咳病例的地区、季节和年龄分布相似,北京儿童医院就诊的百日咳患儿以河北(41.6%～45.2%)、北京(36.4%～42.9%)两地为主,诊断病例集中于夏秋季节(5月份-9月份),婴儿是百日咳发病的主要人群(77.5%～89.3%)。2种实验室诊断方法相比,典型临床症状"吸气性回声"在细菌培养阳性样本组更为常见(X~2=5.086,P=0.024)。以临床诊断为标准,细菌培养和荧光定量PCR诊断百日咳的灵敏度分别为27.1%和51.5%,特异度分别为79.0%和59.0%;不满足临床诊断标准的458例患儿中,细菌培养或荧光定量PCR检测为阳性的共193例(42.1%)。结论临床诊断和实验室诊断百日咳揭示的临床流行病学特征相似。以临床诊断为标准,细菌培养诊断百日咳灵敏度低、特异度高,荧光定量PCR灵敏度较高、特异度较低。实验室检测能发现更多临床不典型病例。
2019年04期 v.11;No.62 263-267页 [查看摘要][在线阅读][下载 1840K] [下载次数：642 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：38 ] |[阅读次数：1 ] - 郭健莲;肖斌龙;刘惠娜;江先海;徐忠玉;
目的评价新开发的一种基因芯片技术在6种常见致病菌的耐药基因检测中的作用,以期快速、高效地监测相关细菌的耐药情况。方法收集临床分离的革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌41株、肠球菌33株)和革兰氏阴性菌(大肠埃希菌57株、肺炎克雷伯菌39株、鲍曼不动杆菌32株、铜绿假单胞菌35株),通过微生物鉴定药敏测试系统进行药敏测试;同时制备耐药基因芯片,对各菌株行多重PCR扩增、芯片杂交及检测;比较药敏实验和芯片检测结果的符合率。结果研究显示6种常见致病菌的β-内酰胺类、大环内酯-林克酰胺-链阳菌素、四环素类、氯霉素类、甲氧苄啶和磺胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类耐药基因阳性率与药敏试验结果一致,总符合率在93%～100%,其中仅有肺炎克雷伯菌检出青霉素类耐药基因blaZ,大肠埃希菌未检出碳青霉类耐药基因。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌的糖肽类耐药基因阳性率与药敏试验结果一致,但金黄色葡萄球菌、肠球菌、铜绿假单胞菌糖肽类耐药基因阳性率与药敏试验结果存在差异。结论新开发的芯片可检出6种常见致病菌的8类抗生素耐药基因,而青霉素类耐药基因blaZ可能在芯片设计上仅适用于肺炎克雷伯菌,碳青霉类耐药基因可能在该芯片设计上不适用于大肠埃希菌,有待进一步改进。
2019年04期 v.11;No.62 268-275+302页 [查看摘要][在线阅读][下载 3211K] [下载次数：341 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：1 ] - 常方圆;冯泽瑞;许迎春;张秋霞;
目的探讨miR-21在黄芪甲苷保护氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症损伤中的作用及其机制。方法将体外培养的HUVEC分为对照组(未干预)、模型组(以100μmol/L ox-LDL作用24 h)、治疗-低剂量(L)组、治疗-中剂量(M)组和治疗-高剂量(H)组,其中治疗-L、M和H组细胞以100μmol/L ox-LDL作用24 h后,分别加入10、20和40 mg/L的黄芪甲苷作用2 h。MTT法检测细胞的存活率,ELISA法检测细胞上清液中炎症相关因子TNF-α、IL-6和NF-κB的含量,RT-PCR检测细胞内miR-21和TLR4 mRNA的表达,Western blot检测TLR4蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-21和TLR4的靶向关系。转染miR-21模拟物和抑制剂构建miR-21过表达和低表达的HUVEC株,观察miR-21对HUVEC炎症因子分泌和TLR4表达的影响;同时,在给予40 mg/L的黄芪甲苷治疗的基础上,观察转染miR-21抑制剂下调miR-21表达对黄芪甲苷作用下HUVEC炎症因子的影响。结果与对照组相比,模型组、治疗-L组、治疗-M组和治疗-H组细胞存活率和细胞中miR-21表达显著降低,而细胞上清液中TNF-α、IL-6和NF-κB的含量以及细胞中TLR4 mRNA、蛋白的表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,治疗-L组、治疗-M组和治疗-H组细胞存活率和miR-21表达逐渐升高,而TNF-α、IL-6和NF-κB的含量以及TLR4 mRNA、蛋白的表达逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实TLR4是miR-21的潜在靶基因。miR-21过表达降低HUVEC内炎症因子的分泌和TLR4的表达,反之,则促进HUVEC内炎症因子的分泌和TLR4的表达;下调miR-21表达后可逆转黄芪甲苷对HUVEC炎症因子的调控。结论黄芪甲苷可减轻ox-LDL诱导的HUVEC炎症损伤,其作用机制可能与上调miR-21靶向抑制TLR4表达有关。
2019年04期 v.11;No.62 276-282+309页 [查看摘要][在线阅读][下载 2489K] [下载次数：318 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：2 ] - 年士艳;冯磊;
目的研究miR-548c-3p对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测TRIM59 mRNA和miR-548c-3p的表达,Western blot检测TRIM59、增殖相关蛋白CyclinD1和p21,及迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达水平,MTT法测定HepG2细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-548c-3p与TRIM59的调控关系。结果与正常肝细胞L02相比,在肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402组中TRIM59的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-548c-3p的表达量则均显著降低(P<0.05);过表达miR-548c-3p和抑制TRIM59表达均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-548c-3p靶向负调控TRIM59的表达;过表达TRIM59逆转了过表达miR-548c-3p对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-548c-3p通过靶向TRIM59基因抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-548c-3p是肝癌的潜在治疗靶点。
2019年04期 v.11;No.62 283-289页 [查看摘要][在线阅读][下载 2432K] [下载次数：252 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：29 ] |[阅读次数：1 ] - 尚晓宇;顾国威;柳国权;齐靖;解强;李坤;
目的研究人防御素HD-5在胃癌发生发展中的作用,探讨其作为胃癌标志物的可能性。方法组织标本来自于广州市番禺区中心医院接受胃癌切除手术的患者,采用免疫组化、实时荧光定量PCR技术比较HD-5在胃癌组织和正常组织中的表达差异,并通过细胞培养、细胞转染技术在胃癌细胞系AGS中过表达HD-5基因,研究其对胃癌细胞增殖能力、迁移能力和裸鼠成瘤的影响。结果 HD-5在胃癌组织中的mRNA水平和蛋白表达均明显低于周围正常组织(P<0.05),胃癌细胞系AGS中过表达HD-5显著抑制细胞增殖能力(P<0.05),细胞迁移能力(P<0.05);此外,HD-5过表达的AGS细胞在裸鼠体内的生长速度较对照组显著变慢(P<0.05)。结论 HD-5能够抑制胃癌的增殖、迁移和体内肿瘤生长速度,是一个潜在的肿瘤抑制因子。
2019年04期 v.11;No.62 290-294页 [查看摘要][在线阅读][下载 2489K] [下载次数：151 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 许立国;冯广森;林亚超;李智;
目的分析树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)免疫联合CT引导下氩氦刀冷冻消融术对结直肠癌肝转移患者T淋巴细胞亚群、癌胚抗原(CEA)水平及生存质量的影响。方法选取2016年1月至2018年3月本院收治的68例结直肠癌肝转移患者,简单随机化分为对照组(34例)、观察组(34例),对照组予以CT引导下氩氦刀冷冻消融术,观察组予以DC-CIK细胞免疫联合CT引导下氩氦刀冷冻消融术,比较两组术后3个月缓解率、全血T淋巴细胞亚群(CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+))、血清糖类抗原242(CA242)、CEA、糖类抗原199(CA199)水平、微小RNA(miR)-21、miR-106a表达量、欧洲癌症研究治疗组织研发癌症患者生存质量评定量表评分(EORTC QLQ-C30)。结果观察组术后3个月缓解率为61.76%高于对照组的20.59%(P<0.05);观察组术后3个月CD~(3+)(%)、CD~(4+)(%)、CD~(4+)/CD~(8+)高于对照组(P<0.05);观察组术后3个月血清CA242、CEA、CA199水平低于对照组(P<0.05);观察组术后3个月miR-21、miR-106a表达量低于对照组(P<0.05);观察组术后3个月功能量表、整体生活质量量表评分高于对照组,症状量表、单项测试项目评分低于对照组(P<0.05)。结论对结直肠癌肝转移患者联合应用DC-CIK细胞免疫、CT引导下氩氦刀冷冻消融术,能提高患者免疫功能、生存质量,增强对肿瘤杀灭作用,其机制可能与抑制促癌miR-21、miR-106a表达有关。
2019年04期 v.11;No.62 295-302页 [查看摘要][在线阅读][下载 2133K] [下载次数：131 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：2 ] - 赵舒杨;雷艳杰;马世杰;高明;
目的探讨龙葵碱联合Krüppel样转录因子16(KLF16)基因对人胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人胶质瘤U87细胞,将特异性KLF16 siRNA和阴性对照siRNA Control转染U87细胞,分别命名为si-KLF16组和si-NC组,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测转染后细胞中KLF16的表达情况。使用不同浓度(2.5、5、10、20、30μg/μL)的龙葵碱分别作用si-NC组和si-KLF16组细胞48 h,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率并筛选半数抑制浓度(IC50),以IC50为龙葵碱后续实验浓度,根据是否添加龙葵碱处理实验分为4组,si-NC组、si-KLF16组、si-NC+Sol组、si-KLF16+Sol组,分别使用MTT和流式细胞仪测定各组细胞增殖和凋亡能力,Western blot分析各组细胞中Ki-67、PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果胶质瘤U87细胞转染后,si-KLF16组细胞中KLF16 mRNA和蛋白表达显著低于si-NC组(P<0.05)。筛选出浓度为20μg/μL的龙葵碱作为后续实验浓度。与si-NC组比,si-KLF16组、si-NC+Sol组和si-KLF16+Sol组细胞增殖能力均受到明显抑制(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05)。与si-KLF16组和si-NC+Sol组比,si-KLF16+Sol组细胞增殖抑制作用和凋亡促进作用更显著(P<0.05)。结论龙葵碱联合KLF16基因能够协同抑制胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与调控Ki-67、PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达有关。
2019年04期 v.11;No.62 303-309页 [查看摘要][在线阅读][下载 3243K] [下载次数：309 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：2 ] - 赵梅;张志宏;郭忠燕;陈营;
目的探讨直肠癌患者外周血中Galectin-3 mRNA、MUC1 mRNA的表达及临床意义。方法选取直肠癌患者92例、直肠腺瘤患者31例以及健康对照组37例为研究对象,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测受试人员外周血中Galectin-3 mRNA、MUC1 mRNA的表达,分析不同临床特征患者Galectin-3 mRNA、MUC1 mRNA的表达差异,探讨Galectin-3 mRNA、MUC1 mRNA的表达与患者预后的关系。结果直肠癌患者外周血Galectin-3 mRNA、MUC1 mRNA表达阳性率分别为63.0%和53.3%,显著高于直肠腺癌组和健康对照组(P<0.05),且Galectin-3 mRNA、MUC1 mRNA的表达与肿瘤分期、组织分化以及淋巴结转移有关(P<0.05)。Galectin-3 mRNA、MUC1 mRNA阳性患者的5年生存率显著低于阴性患者(P<0.05)。结论 Galectin-3 mRNA、MUC1 mRNA的表达与结肠癌的发生和发展密切相关,检测两种指标水平有助于对直肠癌患者预后评价。
2019年04期 v.11;No.62 310-314页 [查看摘要][在线阅读][下载 2297K] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：1 ] - 陈杰华;马海燕;
目的探究硬膜外阻滞对结肠癌根治术患者认知功能及炎性蛋白表达的影响,为优化结肠癌根治术麻醉方案提供理论依据。方法本次探究对象为2015年2月至2017年2月于我院行结肠癌根治术的92例结肠癌患者,根据麻醉方案的不同进行分组,将采用单纯全身麻醉的45例患者设为对照组,采用硬膜外阻滞复合全身麻醉的47例患者设为观察组。记录2组患者出血量、苏醒时间等手术情况;术前、术后1 d、3 d采用简易精神状态量表(MMSE)评价2组患者认知功能;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2组患者术前、术后1 d、3 d血清S-100β蛋白、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平、白细胞介素(IL-1α)、高敏C反应蛋白(hs-CRP);比较2组患者术后1 d Steward苏醒评分以及疼痛(VAS)评分;记录术后恶心呕吐发生情况。结果观察组与对照组术中出血量、丙泊酚用量、瑞芬太尼用量差异无统计学意义(P>0.05),观察组苏醒时间、拔管时间显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组与对照组术后MMSE评分、血清S-100β蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1α、hs-CRP水平均显著高于术前,差异具有统计学意义(P<0.05),术后1 d、3 d观察组MMSE评分显著高于对照组,血清S-100β蛋白、TNF-α、IL-6水平显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组术后Steward苏醒评分显著高于对照组,VAS评分显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组恶心呕吐发生率为12.77%,显著低于对照组(31.11%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论相较于单纯全身麻醉,硬膜外阻滞麻醉能显著提升术后认知功能,改善术后S-100β蛋白、TNF-α等炎性因子水平,不良反应发生率更低。
2019年04期 v.11;No.62 315-319+337页 [查看摘要][在线阅读][下载 2040K] [下载次数：85 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：1 ] - 谢希;刘莉莉;李书会;
目的探讨尿毒症患者血液透析前后血清氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、血尿酸(BUA)、肌钙蛋白T(cTnT)水平变化及其临床意义。方法选取2013年9月至2018年1月本院血液透析治疗的尿毒症患者160例,依据心血管疾病发生情况分为发生组(n=124)和未发组(n=36),同期选取健康人员作为健康对照组(n=160),检测所有人员血清NT-proBNP、BUA、cTnT水平,分析血清NT-proBNP、BUA、cTnT水平变化与心血管疾病的关系。结果尿毒症患者血清NT-proBNP、BUA、cTnT水平明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);发生组和未发组血液透析后血清NT-proBNP、BUA、cTnT水平明显低于透析前,未发组血液透析后血清NT-proBNP、BUA、cTnT水平明显低于发生组,差异有统计学意义(P<0.05);单因素分析结果显示,年龄(>60岁)、糖尿病、高血压和血液透析后血清NT-proBNP>4 381 ng/L、BUA>420μmol/L、cTnT>0.1μg/L水平与患者心血管疾病的发生有关(P<0.05);Cox回归性分析结果显示,校正年龄、糖尿病、高血压后,NT-proBNP>4 381 ng/L、BUA>420μmol/L、cTnT>0.1μg/L仍与患者心血管疾病的发生有明显的相关性(P<0.05)。结论尿毒症患者血液透析后血清NT-proBNP、BUA、cTnT水平下降,透析后NT-proBNP>4 381 ng/L、BUA>420μmol/L、cTnT>0.1μg/L与心血管疾病的发生密切相关。
2019年04期 v.11;No.62 320-324+328页 [查看摘要][在线阅读][下载 2254K] [下载次数：171 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：1 ] - 胡耀华;卓书伟;符春苗;
目的探讨电阻抗法血小板计数(PLT-I)、荧光通道血小板计数(PLT-F)、红细胞分布宽度(RDW)和红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)指标变化与检验标本不同保存条件的关系。方法选取2017年1月至2018年10月体检的健康者460例,均采集静脉血标本,每个标本等分2份,在4℃、25℃下保存,分别于即刻、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h检测PLT-I、PLT-F、RDW和MCHC水平。结果 4℃条件下,保存24 h后PLT-I和MCHC水平与即刻检测时的比较,差异有统计学意义(P<0.05),即刻、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h PLT-F和RDW比较差异无统计学意义(P>0.05);25℃条件下,保存6 h、12 h和24 h后RDW和MCHC明显高于即刻检测时的,差异有统计学意义(P<0.05),保存24 h后PLT-I明显低于即刻检测时(P<0.05),即刻、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h PLT-F比较差异无统计学意义(P<0.05);保存6 h、12 h和24 h时,25℃条件下,RDW水平明显高于4℃下的水平(P<0.05);保存12 h、24 h时,25℃下MCHC明显高于4℃下的水平(P<0.05)。结论 PLT-I、PLT-F、RDW和MCHC指标变化与样本保存的温度、时间有关,以4℃,保存24 h内为宜,日常检测中应注意样本保存的时间和温度。
2019年04期 v.11;No.62 325-328页 [查看摘要][在线阅读][下载 1674K] [下载次数：94 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：2 ] - 孙志豪;张荣华;钟超珍;
目的利用液相芯片技术检测东莞地区儿童下呼吸道感染的病原体,获得病原谱流行病学特征,为临床的诊治提供可靠的依据。方法采集2017年11月至2018年10月在东莞市妇幼保健院住院的2 850例下呼吸道感染儿童的咽拭子标本,利用液相芯片技术进行13种呼吸道病原体的核酸检测,并对结果按照0～≤6月龄、>6～≤12月龄、>1～≤3周岁、>3～≤7周岁、>7周岁的年龄分组进行统计分析。结果 2 850例下呼吸道感染患儿中检出病原体阳性的有1 720例(60.35%),检出2种或2种以上病原体阳性的有533例(18.70%);在13种病原体中,检出率最高的前3种分别是呼吸道合胞病毒(RSV)661例(23.19%),肺炎链球菌(SP)629例(22.07%)和流感嗜血杆菌(Hi)282例(9.89%);而混合感染率排名前5的病原体分别是卡他莫拉菌(MC,98/119,82.35%)、鼻病毒(HRV,21/34,61.76%),流感嗜血杆菌(Hi,171/282,60.64%),人偏肺病毒(hMPV,44/75,58.67%)和肺炎链球菌(SP,357/629,56.76%)。各年龄组间感染的病原谱存在差异,低年龄段患儿中最常见的呼吸道病原体是RSV;SP和肺炎支原体(MP)的检出率随着年龄的增长呈现上升的趋势。检出率随季节变化较明显的病原体是SP、RSV、MC和Hi;SP的检出率在5-10月份间均维持在较高水平(>20%);RSV检出率在3月份有1个次高峰,在9月份达到最高峰;Hi检出率在5月份达到高峰;MC和MP的检出高峰期均是10-11月份。结论SP、RSV、MC和Hi在患儿中检出率存在明显的季节性变化;RSV、SP和MP在各年龄组的检出率存在差异;在临床诊疗活动中应注意病原体流行的季节变化、年龄组常见病原体差异以及多重病原体的感染。
2019年04期 v.11;No.62 329-337页 [查看摘要][在线阅读][下载 2280K] [下载次数：234 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：31 ] |[阅读次数：3 ]